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引物引起PCR反应假阴性问题的解决方案

引物引起PCR反应假阴性问题的解决方案:

a. 引物质量。

b. 引物的浓度。

c. 两条引物的浓度是否对称。

解决对策:

a. 选定一个好的引物合成单位。

b. 引物的浓度不仅要看OD值,更要注重引物原液做琼脂糖凝胶电泳,一定要有引物条带出现,而且两引物带的亮度应大体一致,如一条引物有条带,一条引物无条带,此时做PCR有可能失败,应和引物合成单位协商解决。如一条引物亮度高,一条亮度低,在稀释引物时要平衡其浓度。

c. 引物应高浓度小量分装保存,防止多次冻融或长期放冰箱冷藏部分,导致引物变质降解失效。

d. 引物设计不合理,如引物长度不够,引物之间形成二聚体等。


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