操作步骤:

步骤1:配制程序冻存液,放在室温备用或放在4℃预冷
步骤2:离心收集对数生长期的细胞(贴壁细胞消化下来离心,悬浮细胞直接离心,转速1200rpm或250g,时间3min)
步骤3:用配制好的冻存液重悬细胞,按照1~1.5mL/管分装到冻存管中,拧紧管盖,做好标记
步骤4:冻存管放入冻存盒,冻存盒放入-80℃冰箱过夜(24h)
步骤5:冻存管从冻存盒取出,转移至液氮长期保存

方法二:使用无血清非程序冻存液
无血清非程序冻存液是一种商品化的冻存液,无需自己配制,无需降温盒,大大提升了便捷性。
但是,并非所有细胞都适用于这种冻存液,使用前必须做冻存测试,没问题后再批量应用。
细胞特性
种属来源;人
组织来源;肾
性别年龄;
生长特性;贴壁生长
细胞形态;上皮细胞样
细胞规格;1 X 106cells/T25或1 mL冻存管
培养条件;EMEM+10% fetal bovine serum37 ℃, 5% CO2
冻存条件;90% FBS + 10% DMSO
传代方法;1:3传代,
2-3天传1代
运输和保存

干冰运输及复苏好存活细胞
(1)1mL冻存管包装干冰运输,收到后-80度冰箱保存过夜后转入液氮或直接复苏,若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染,请立即与我们联系。
(2)T25瓶复苏的存活细胞常温发货,收到后按照细胞接收后的处理方法操作。
细胞接收后的处理
1)收到细胞后,75%酒精瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h,若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染,请拍照后及时联系我们。
2)请在4或5X显微镜下确认细胞状态,同时给刚收到的细胞拍照(10×,20×)各2-3张以及培养瓶外观照片一张留存,作为售后时收到时细胞状态的依据。
3)贴壁细胞:细胞在37℃培养箱中放置2-3h,显微镜下观察细胞的生长和贴壁情况,有些贴壁细胞在快递运送过程中会因振动脱落和脱落后成团的情况。若镜下观察细胞的生长密度若在60%以下,可去除培养瓶中灌液培养基(若有未贴壁的细胞需要离心回收,重悬打入到原培养瓶中),加入新配制的完全培养基6-8mL,放到细胞培养箱中继续培养。若细胞生长密度达70%-80%以上,可以对细胞进行传代处理。传代过程中,若因运输振动脱落的细胞需要离心回收。
4)备注:运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞,请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。 收到细胞后次传代建议T25培养瓶1:2传代 。
一.培养基及培养冻存条件准备
1) 准备1640(推荐iCell-0002)培养基;胎牛血清,10%;双抗,1%。
2) 培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37℃,培养箱湿度为70%-80%。
3) 冻存液:90%血清,10%DMSO,现用现配。
细胞处理

1) 冻存细胞的复苏
将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加入到含4-6mL完全培养基的离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心3-5min,弃去上清液,完全培养基重悬细胞。然后将细胞悬液加入含6-8ml完全培养基的培养瓶(或皿)中37℃培养过夜。天显微镜下观察细胞生长情况和细胞密度。
2) 细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。
对于贴壁细胞传代可以参考以下方法
1. 弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加入0.25%(w / v)胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培养瓶中(T25瓶1-2mL,T75瓶2-3mL),置于37℃培养箱中消化1-2分钟(难消化的细胞可以适当延长消化时间),然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加入3-4ml含10%FBS的培养基来终止消化。
3. 轻轻打匀后吸出,在1000RPM条件下离心3-5min,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀。将细胞悬液按1:2的比例分到新T25瓶中,添加6-8ml按照说明书要求配置的新的完全培养基以保持细胞的生长活力,后续传代根据实际情况按1:2~1:5的比例进行。
3)细胞冻存: 收到细胞后建议在培养前3代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。
公司正在出售的产品:
小量腺病毒树脂法纯化试剂盒
细胞氧化酶活性荧光定量检测试剂盒
人TGF-β诱导早期基因1(TIEG1)elisa检测试剂盒
大鼠癌胚抗原(CEA)elisa分析检测试剂盒
小鼠酸性成纤维细胞生长因子(aFGF/FGF-1)elisa检测试剂盒
大鼠脯氨酸羟化酶(PHD)elisa检测试剂盒
乙酰胆碱酯酶A-CHE测试盒 50管/24样 比色法
人电压门控钾通道抗体(VGKC-ab)elisa分析检测试剂盒
体液HHV6-A(HUMAN
HERPESVIRUS 6-A)病毒定性检测试剂盒
清道夫受体STAB2抗体 Stabilin 2
染色质修饰蛋白4B(4C)抗体 CHMP4B+CHMP4C
HAVCR2(CD366)抗体 HAVCR2/TIM-3
IP3KC蛋白抗体 IP3KC
孕受体膜相关元件抗体 PGRMC
着丝粒蛋白C1抗体 CENPC1
副肿瘤性神经元抗原/副肿瘤抗原Ma2抗体 MA2
钙激活钾通道蛋白β4抗体 KCNMB4
细胞间粘附分子-1(CD54)单克隆抗体 ICAM1/CD54
细胞色素P450 1A1单克隆抗体 CYP1A1
TRMT1蛋白抗体 TRMT1
ZC3H14蛋白抗体 ZC3H14
VMRCRCZ人肾细胞癌细胞Alexa Fluor
647标记小鼠CD107a单克隆抗体 mouse CD107a/AF647
APC标记小鼠CD45单克隆抗体 mouse CD45/APC
卷曲螺旋结构域蛋白30抗体 CCDC30
老年痴呆相关类钙粘蛋白CS1抗体 CLSTN1
小鼠骨特异性碱性磷酸酶B(ALP-B)elisa检测试剂盒
JC-10线粒体膜电位检测试剂盒100T
载玻片细胞IGF 蛋白表达荧光显微镜检测试剂盒
磷酸甘油酸脱氢酶抗体
PHGDH
卷曲螺旋结构域蛋白28B抗体
CCDC28B