操作步骤:

步骤1:配制程序冻存液,放在室温备用或放在4℃预冷
步骤2:离心收集对数生长期的细胞(贴壁细胞消化下来离心,悬浮细胞直接离心,转速1200rpm或250g,时间3min)
步骤3:用配制好的冻存液重悬细胞,按照1~1.5mL/管分装到冻存管中,拧紧管盖,做好标记
步骤4:冻存管放入冻存盒,冻存盒放入-80℃冰箱过夜(24h)
步骤5:冻存管从冻存盒取出,转移至液氮长期保存

方法二:使用无血清非程序冻存液
无血清非程序冻存液是一种商品化的冻存液,无需自己配制,无需降温盒,大大提升了便捷性。
但是,并非所有细胞都适用于这种冻存液,使用前必须做冻存测试,没问题后再批量应用。
细胞特性
产品名称
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P19小鼠畸胎瘤细胞
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英文名称
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P19:P19
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分类
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小鼠细胞系
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货号
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XG-X3676
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组织来源
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胚胎;畸胎癌
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形态
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上皮细胞样
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细胞别称:P-19;P19 ;小鼠畸胎瘤细胞
种属来源:小鼠
年龄性别:雄性
组织来源:胚胎;畸胎癌
生长特性:贴壁生长
细胞形态:上皮细胞样
背景简介:P19细胞是加拿大渥太华大学的Mc Burney 等在1982 年从雄性C3H/He小鼠畸胎瘤中分离得到的 , 是一种能够在体外培养的多能干细胞,P19 细胞团经RA 诱导可分化成神经元、胶质细胞和纤维母细胞;而经二甲基亚砜(DM SO ) 诱导则分化成心肌、骨骼肌和平滑肌细胞;在P19细胞向神经元分化的过程中,神经发育相关基因的表达模式基本模拟了正常小鼠神经发育过程,
因此, P19 目前被用作一个研究神经发育的体外模型。P19细胞在含有0.1mMβ-巯基乙醇的培养基:中克隆的效率高。细胞具有多能性:在500nM维生素A酸诱导下,细胞可以分化成神经样和神经胶质样细胞;在0.5%-1.0%二甲亚砜(DMSO)存在下,细胞分化形成心脏和骨骼肌样基质,但不形成神经样或神经胶质样细胞。在DMSO和维生素A酸同时存在时,细胞的分化与只有维生素A酸一样。
生物等级:1
细胞规格:1×106cells/T25培养瓶或者1mL冻存管包装
支原体检测:无
基因表达情况:
保藏机构:ATCC; CRL-1825 DSMZ; ACC-316
ECACC; 95102107
培养基:90%RPMI-1640+10% FBS
培养条件:气相:95%空气+5%二氧化碳;温度:37℃
冻存条件:无血清冻存液,液氮储存
倍增时间:~48-72小时
运输和保存

干冰运输及复苏好存活细胞
(1)1mL冻存管包装干冰运输,收到后-80度冰箱保存过夜后转入液氮或直接复苏,若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染,请立即与我们联系。
(2)T25瓶复苏的存活细胞常温发货,收到后按照细胞接收后的处理方法操作。
细胞接收后的处理
1)收到细胞后,75%酒精瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h,若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染,请拍照后及时联系我们。
2)请在4或5X显微镜下确认细胞状态,同时给刚收到的细胞拍照(10×,20×)各2-3张以及培养瓶外观照片一张留存,作为售后时收到时细胞状态的依据。
3)贴壁细胞:细胞在37℃培养箱中放置2-3h,显微镜下观察细胞的生长和贴壁情况,有些贴壁细胞在快递运送过程中会因振动脱落和脱落后成团的情况。若镜下观察细胞的生长密度若在60%以下,可去除培养瓶中灌液培养基(若有未贴壁的细胞需要离心回收,重悬打入到原培养瓶中),加入新配制的完全培养基6-8mL,放到细胞培养箱中继续培养。若细胞生长密度达70%-80%以上,可以对细胞进行传代处理。传代过程中,若因运输振动脱落的细胞需要离心回收。
4)备注:运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞,请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。 收到细胞后次传代建议T25培养瓶1:2传代 。
一.培养基及培养冻存条件准备
1) 准备1640(推荐iCell-0002)培养基;胎牛血清,10%;双抗,1%。
2) 培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37℃,培养箱湿度为70%-80%。
3) 冻存液:90%血清,10%DMSO,现用现配。
细胞处理

1) 冻存细胞的复苏
将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加入到含4-6mL完全培养基的离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心3-5min,弃去上清液,完全培养基重悬细胞。然后将细胞悬液加入含6-8ml完全培养基的培养瓶(或皿)中37℃培养过夜。天显微镜下观察细胞生长情况和细胞密度。
2) 细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。
对于贴壁细胞传代可以参考以下方法
1. 弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加入0.25%(w / v)胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培养瓶中(T25瓶1-2mL,T75瓶2-3mL),置于37℃培养箱中消化1-2分钟(难消化的细胞可以适当延长消化时间),然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加入3-4ml含10%FBS的培养基来终止消化。
3. 轻轻打匀后吸出,在1000RPM条件下离心3-5min,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀。将细胞悬液按1:2的比例分到新T25瓶中,添加6-8ml按照说明书要求配置的新的完全培养基以保持细胞的生长活力,后续传代根据实际情况按1:2~1:5的比例进行。
3)细胞冻存: 收到细胞后建议在培养前3代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。
公司正在出售的产品:
乙酰辅酶A转运蛋白1抗体 Anti-SLC33A1
ZC3H14蛋白抗体
ZC3H14
NDUFC2蛋白抗体
NADH脱氢酶3抗体
MT-ND3
FAM126B蛋白抗体
FAM126B
辣椒素受体样蛋白1抗体 Anti-TRPV2/VRL1
核糖核酸酶6抗体 Anti-Ribonuclease 6
神经元素3抗体 Anti-NGN3/Neurogenin 3
NDUFC2
磷酸化原基因蛋白18抗体 Anti-Phospho-Stathmin(Ser38)
神经肽Y受体2抗体 Anti-NPY2R
环指蛋白6抗体 Anti-RNF6
肿瘤坏死因子-α抗体 Anti-TNF-alpha
大鼠泛素连接酶(E3/UBPL)elisa生化检测试剂盒
P19小鼠畸胎瘤细胞E3/UBPL ELISA
Kit
山羊骨形成蛋白2(BMP-2)elisa生化检测试剂盒
GoatBMP-2ELISAKit
载玻片细胞DAP KINASE蛋白表达NBT显色光学显微镜检测试剂盒
大鼠胰岛素样生长因子结合蛋1(IGFBP-1)elisa检测试剂盒
血液维生素A高效液相色谱法定量检测试剂盒
小鼠Slit同源物1(Slit1)elisa检测试剂盒
JNK/ SAPK抑制激酶抗体
JIK/TAOK3
羧肽酶CPO抗体
Carboxypeptidase O
大鼠白蛋白elisa检测试剂盒
小鼠胎球蛋白A(Fetuin A)elisa生化检测试剂盒
人Toll样受体6(TLR6)elisa生化检测试剂盒
组织蛋白磷酸酶2A (PP2A)活性比色法定量检测试剂盒