操作步骤：
步骤1：配制程序冻存液，放在室温备用或放在4℃预冷
步骤2：离心收集对数生长期的细胞（贴壁细胞消化下来离心，悬浮细胞直接离心，转速1200rpm或250g，时间3min）
步骤3：用配制好的冻存液重悬细胞，按照1~1.5mL/管分装到冻存管中，拧紧管盖，做好标记
步骤4：冻存管放入冻存盒，冻存盒放入-80℃冰箱过夜（24h）
步骤5：冻存管从冻存盒取出，转移至液氮长期保存
方法二：使用无血清非程序冻存液
无血清非程序冻存液是一种商品化的冻存液，无需自己配制，无需降温盒，大大提升了便捷性。
但是，并非所有细胞都适用于这种冻存液，使用前必须做冻存测试，没问题后再批量应用。
细胞特性
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产品名称
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RKO人结肠腺癌细胞
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英文名称
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RKO:RKO
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分类
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人细胞系
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货号
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XG-X3517
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组织来源
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结肠癌
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形态
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上皮细胞样
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生长特性 贴壁细胞
细胞形态 上皮细胞样
生长培养基 MEM（含NEAA）＋10% FBS＋1% P/S
冻存条件
冻存液：55% 基础培养基+40%FBS+5%DMSO
温度：液氮
培养条件
气相：空气，95%；CO2，5%
温度：37℃
推荐传代比例 1:3-1:4
推荐换液频率 2~3次/周
背景描述 RKO细胞是一个低分化的结肠癌细胞系。RKO细胞含有野生型p53，但缺乏人甲状腺受体核受体(h-TRβ1)。RKO细胞的p53蛋白的水平高于RKO-E6细胞，RKO细胞是RKO-E6细胞和RKO-AS45-1细胞的亲本细胞系。RKO细胞在裸鼠中成瘤，且在软琼脂中形成集落。
组织来源 结肠癌
细胞类型 肿瘤细胞
肿瘤类型 肠癌细胞
生物等级 1
倍增时间 ~21 hours
致瘤性 Yes, in nude mice.Yes, in soft
agar.
受体表达情况 urokinase receptor (u-PAR)
保藏机构 ATCC; CRL-2577
运输和保存
干冰运输及复苏好存活细胞
（1）1mL冻存管包装干冰运输，收到后-80度冰箱保存过夜后转入液氮或直接复苏，若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们联系。
（2）T25瓶复苏的存活细胞常温发货，收到后按照细胞接收后的处理方法操作。
细胞接收后的处理
1）收到细胞后，75%酒精瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h，若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染，请拍照后及时联系我们。
2）请在4或5X显微镜下确认细胞状态，同时给刚收到的细胞拍照（10×，20×）各2-3张以及培养瓶外观照片一张留存，作为售后时收到时细胞状态的依据。
3）贴壁细胞：细胞在37℃培养箱中放置2-3h，显微镜下观察细胞的生长和贴壁情况，有些贴壁细胞在快递运送过程中会因振动脱落和脱落后成团的情况。若镜下观察细胞的生长密度若在60%以下，可去除培养瓶中灌液培养基（若有未贴壁的细胞需要离心回收，重悬打入到原培养瓶中）,加入新配制的完全培养基6-8mL，放到细胞培养箱中继续培养。若细胞生长密度达70%-80%以上，可以对细胞进行传代处理。传代过程中，若因运输振动脱落的细胞需要离心回收。
4）备注：运输用的培养基（灌液培养基）不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。 收到细胞后次传代建议T25培养瓶1：2传代 。
一．培养基及培养冻存条件准备
1） 准备1640（推荐iCell-0002）培养基；胎牛血清，10%；双抗，1%。
2） 培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。
3） 冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。
细胞处理
1） 冻存细胞的复苏
将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入到含4-6mL完全培养基的离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心3-5min，弃去上清液，完全培养基重悬细胞。然后将细胞悬液加入含6-8ml完全培养基的培养瓶（或皿）中37℃培养过夜。天显微镜下观察细胞生长情况和细胞密度。
2） 细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于贴壁细胞传代可以参考以下方法
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培养瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培养箱中消化1-2分钟（难消化的细胞可以适当延长消化时间），然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加入3-4ml含10%FBS的培养基来终止消化。
3. 轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心3-5min，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。将细胞悬液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照说明书要求配置的新的完全培养基以保持细胞的生长活力，后续传代根据实际情况按1:2~1:5的比例进行。
3）细胞冻存: 收到细胞后建议在培养前3代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。
公司正在出售的产品：
大鼠抑瘤素M(OSM)elisa检测试剂盒
大鼠活化素A受体抗体IgM(ACV-RAb
IgM)elisa分析检测试剂盒
小鼠转甲状腺素蛋白(TTR)elisa检测试剂盒
人促生长释放(GHRH)elisa检测试剂盒免费代测
耶尔森氏菌属（Yersinia）鉴定
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磷酸化造血细胞激酶抗体 phospho-Hck (Tyr411)
磷脂酰肌醇-5-磷酸盐-4激酶2型β抗体 PIP5K2B
EHD1蛋白抗体 EHD1
FAM118A蛋白抗体 FAM118A
锌指蛋白774抗体 ZNF774
信号通路Wnt2抗体 WNT2
程序性死亡配体1（CD274）抗体 PD-L1
单核细胞趋化诱导蛋白1抗体 MCPIP1
RKO人结肠腺癌细胞水解酶结构域蛋白15抗体 ABHD15
丝氨酸或半胱氨酸蛋白水解酶抑制蛋白1抗体 Neuroserpin
PE-Cy7标记小鼠Ly-6G/Ly-6C单克隆抗体 mouse
Ly-6G/Ly-6C/PE-Cy7
PE标记人CD96单克隆抗体 human CD96/PE
组织相容性抗原DP重组兔单克隆抗体 HLA-DPA1
1号染色体开放阅读框109抗体 C1orf109
环腺苷酸应答元件结合蛋白单克隆抗体 CREB-1
肌动蛋白依赖染色质调控因子SMARCD3蛋白抗体 SMARCD3
组织血管紧张素Ⅰ转化酶2（ACE2）活性荧光定量检测试剂盒
人CC趋化因子7
(CCL7/MCP3/SCYA6/SCYA7)elisa分析检测试剂盒
大鼠C型钠尿肽(CNP)elisa检测试剂盒
粘膜相关组织瘤转运蛋白1抗体
MALT1
17号染色体开放阅读框49抗体
C17orf49