操作步骤：
步骤1：配制程序冻存液，放在室温备用或放在4℃预冷
步骤2：离心收集对数生长期的细胞（贴壁细胞消化下来离心，悬浮细胞直接离心，转速1200rpm或250g，时间3min）
步骤3：用配制好的冻存液重悬细胞，按照1~1.5mL/管分装到冻存管中，拧紧管盖，做好标记
步骤4：冻存管放入冻存盒，冻存盒放入-80℃冰箱过夜（24h）
步骤5：冻存管从冻存盒取出，转移至液氮长期保存
方法二：使用无血清非程序冻存液
无血清非程序冻存液是一种商品化的冻存液，无需自己配制，无需降温盒，大大提升了便捷性。
但是，并非所有细胞都适用于这种冻存液，使用前必须做冻存测试，没问题后再批量应用。
细胞特性
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产品名称
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NCI-H446人小细胞肺癌细胞
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英文名称
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NCI-H446:NCIH446
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分类
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人细胞系
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货号
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XG-X3472
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组织来源
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肺；转移灶：肋膜渗出癌；小细胞肺癌
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形态
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上皮细胞样
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生长特性 半贴半悬
细胞形态 上皮细胞样
冻存条件
冻存液：55% 基础培养基+40%FBS+5%DMSO
温度：液氮
培养方案A（默认）
生长培养基:
RPMI-1640＋10% FBS＋1% P/S
培养条件:
气相：空气，95%；CO2，5%, 温度：37℃
推荐传代比例 1:3-1:4
推荐换液频率 2-3次/周
参考资料(来源文献)
背景描述 NCI-H446细胞是从一位小细胞肺癌患者的胸水中建立的，NCI-H446细胞的原始形态并不具有小细胞肺癌特征。NCI-H446细胞是小细胞肺癌的生化和形态学上的变种，表达神经元特有的烯醇酶和脑部肌酸激酶同功酶。NCI-H446细胞内多巴脱羧酶、蚕素、抗、催产素或胃泌释放肽未达到可检测水平。C-myc
DNA序列扩增约20倍，c-myc RNA比正常细胞增加15倍。初，传代培养基用RPMI-1640(含5%胎牛血清、10nM氢化可的松、0.005mg/ml胰岛素、0.01mg/ml铁传递蛋白、10nM 17-β-雌二醇、30nM亚硒酸钠)。
年龄（性别） 男性；61岁
组织来源 肺；转移灶：肋膜渗出癌；小细胞肺癌
细胞类型 肿瘤细胞
肿瘤类型 肺癌细胞
生物等级 BSL-1
致瘤性 Yes, in nude mice (The cells
form transplantable tumors with non-typical SCLC histology).
保藏机构 ATCC; HTB-171
运输和保存
干冰运输及复苏好存活细胞
（1）1mL冻存管包装干冰运输，收到后-80度冰箱保存过夜后转入液氮或直接复苏，若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们联系。
（2）T25瓶复苏的存活细胞常温发货，收到后按照细胞接收后的处理方法操作。
细胞接收后的处理
1）收到细胞后，75%酒精瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h，若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染，请拍照后及时联系我们。
2）请在4或5X显微镜下确认细胞状态，同时给刚收到的细胞拍照（10×，20×）各2-3张以及培养瓶外观照片一张留存，作为售后时收到时细胞状态的依据。
3）贴壁细胞：细胞在37℃培养箱中放置2-3h，显微镜下观察细胞的生长和贴壁情况，有些贴壁细胞在快递运送过程中会因振动脱落和脱落后成团的情况。若镜下观察细胞的生长密度若在60%以下，可去除培养瓶中灌液培养基（若有未贴壁的细胞需要离心回收，重悬打入到原培养瓶中）,加入新配制的完全培养基6-8mL，放到细胞培养箱中继续培养。若细胞生长密度达70%-80%以上，可以对细胞进行传代处理。传代过程中，若因运输振动脱落的细胞需要离心回收。
4）备注：运输用的培养基（灌液培养基）不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。 收到细胞后次传代建议T25培养瓶1：2传代 。
一．培养基及培养冻存条件准备
1） 准备1640（推荐iCell-0002）培养基；胎牛血清，10%；双抗，1%。
2） 培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。
3） 冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。
细胞处理
1） 冻存细胞的复苏
将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入到含4-6mL完全培养基的离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心3-5min，弃去上清液，完全培养基重悬细胞。然后将细胞悬液加入含6-8ml完全培养基的培养瓶（或皿）中37℃培养过夜。天显微镜下观察细胞生长情况和细胞密度。
2） 细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于贴壁细胞传代可以参考以下方法
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培养瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培养箱中消化1-2分钟（难消化的细胞可以适当延长消化时间），然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加入3-4ml含10%FBS的培养基来终止消化。
3. 轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心3-5min，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。将细胞悬液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照说明书要求配置的新的完全培养基以保持细胞的生长活力，后续传代根据实际情况按1:2~1:5的比例进行。
3）细胞冻存: 收到细胞后建议在培养前3代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。
公司正在出售的产品：
小鼠前列腺素D2(PGD2)elisa检测试剂盒
重组蛋白G抗体
Protein G
细胞纤毛内转运同源蛋白43抗体
A型流感病毒核输出蛋白抗体
Influenza A Nuclear
export protein
22号染色体开放阅读框40抗体
C22orf40
冰冻切片半胱-6（CASPASE-6）活性原位荧光染色检测试剂盒
人c-sis elisa生化检测试剂盒
大鼠P53elisa检测试剂盒
IFT43
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足细胞表达蛋白/转录因子21抗体 Anti-POD1/TCF-21
丝氨酸/苏氨酸蛋白磷酸酶1调节亚基10抗体 Anti-PNUTS/PPP1R10
泛素相关修饰蛋白特异性蛋白酶5抗体 Anti-SENP5
辣根过氧化物酶标记的驴抗兔IgG H&L
NCI-H446人小细胞肺癌细胞Donkey
Anti-Rabbit IgG H&L / HRP
FRMD3蛋白抗体
FRMD3
犬CC趋化因子受体2(CCR2)elisa生化检测试剂盒
CCR2 ELISA kit
小鼠过氧化物酶体增殖因子活化受体γ( PPAR-γ)elisa生化检测试剂盒
PPAR-γELISAKit
猴补体蛋白5(C5)elisa生化检测试剂盒
C5 ELISA kit
人儿茶酚抑素elisa生化检测试剂盒
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鱼白介素10(IL-10)elisa生化检测试剂盒
大鼠抗促甲状腺素受体抗体(TRAb)elisa检测试剂盒
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