操作步骤:

步骤1:配制程序冻存液,放在室温备用或放在4℃预冷
步骤2:离心收集对数生长期的细胞(贴壁细胞消化下来离心,悬浮细胞直接离心,转速1200rpm或250g,时间3min)
步骤3:用配制好的冻存液重悬细胞,按照1~1.5mL/管分装到冻存管中,拧紧管盖,做好标记
步骤4:冻存管放入冻存盒,冻存盒放入-80℃冰箱过夜(24h)
步骤5:冻存管从冻存盒取出,转移至液氮长期保存

方法二:使用无血清非程序冻存液
无血清非程序冻存液是一种商品化的冻存液,无需自己配制,无需降温盒,大大提升了便捷性。
但是,并非所有细胞都适用于这种冻存液,使用前必须做冻存测试,没问题后再批量应用。
细胞特性
产品名称
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HCC1937人乳腺癌细胞
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英文名称
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HCC1937:HCC1937
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分类
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人细胞系
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货号
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XG-X3311
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组织来源
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;原发性导管癌;3级,ⅡB期
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形态
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上皮细胞样
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生长特性 贴壁细胞
细胞形态 上皮细胞样
生长培养基 RPMI-1640+10% FBS+1% P/S
冻存条件
冻存液:55% 基础培养基+40%FBS+5%DMSO
温度:液氮
培养条件
气相:空气,95%;CO2,5%
温度:37℃
推荐传代比例 1:2-1:4
推荐换液频率 2~3次/周
背景描述 HCC1937细胞1995年10月13日初来源于原发性导管癌,用了11.5个月建株。肿瘤分类为TNMⅡB期,3级。BRCA1分析表明,HCC1937细胞是BRCA 15382C突变纯合的,而来源于同一病人的类母细胞细胞株在这个突变位点上是杂合的。另两个家庭成员也有这个突变;一个同卵双生姐妹也患有乳腺癌。HCC1937细胞有一个后天的Tp53突变,而其野生型等位基因丢失;一个PTEN基因的后天的纯合缺失,以及多个与乳腺癌发病机理相关的位点上发生的杂合突变。HCC1937细胞Her2-neu和p53表达都呈阴性。HCC1937细胞的上皮细胞特异性标志上皮细胞糖蛋2(EGP2)和细胞角蛋白19都呈阳性;雌激su受体(ER)和孕酮(PR)表达阴性。
年龄(性别) 女;23岁
组织来源 ;原发性导管癌;3级,ⅡB期
细胞类型 肿瘤细胞
肿瘤类型 乳腺癌细胞
生物等级 1
倍增时间 ~50-60 hours
受体表达情况 estrogen receptor,
negative;progesterone receptor, negative
基因表达情况 Epithelial glycoprotein 2
(EGP2); cytokeratin 19
保藏机构 ATCC; CRL-2336 DSMZ; ACC-513
运输和保存

干冰运输及复苏好存活细胞
(1)1mL冻存管包装干冰运输,收到后-80度冰箱保存过夜后转入液氮或直接复苏,若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染,请立即与我们联系。
(2)T25瓶复苏的存活细胞常温发货,收到后按照细胞接收后的处理方法操作。
细胞接收后的处理
1)收到细胞后,75%酒精瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h,若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染,请拍照后及时联系我们。
2)请在4或5X显微镜下确认细胞状态,同时给刚收到的细胞拍照(10×,20×)各2-3张以及培养瓶外观照片一张留存,作为售后时收到时细胞状态的依据。
3)贴壁细胞:细胞在37℃培养箱中放置2-3h,显微镜下观察细胞的生长和贴壁情况,有些贴壁细胞在快递运送过程中会因振动脱落和脱落后成团的情况。若镜下观察细胞的生长密度若在60%以下,可去除培养瓶中灌液培养基(若有未贴壁的细胞需要离心回收,重悬打入到原培养瓶中),加入新配制的完全培养基6-8mL,放到细胞培养箱中继续培养。若细胞生长密度达70%-80%以上,可以对细胞进行传代处理。传代过程中,若因运输振动脱落的细胞需要离心回收。
4)备注:运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞,请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。 收到细胞后次传代建议T25培养瓶1:2传代 。
一.培养基及培养冻存条件准备
1) 准备1640(推荐iCell-0002)培养基;胎牛血清,10%;双抗,1%。
2) 培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37℃,培养箱湿度为70%-80%。
3) 冻存液:90%血清,10%DMSO,现用现配。
细胞处理

1) 冻存细胞的复苏
将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加入到含4-6mL完全培养基的离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心3-5min,弃去上清液,完全培养基重悬细胞。然后将细胞悬液加入含6-8ml完全培养基的培养瓶(或皿)中37℃培养过夜。天显微镜下观察细胞生长情况和细胞密度。
2) 细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。
对于贴壁细胞传代可以参考以下方法
1. 弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加入0.25%(w / v)胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培养瓶中(T25瓶1-2mL,T75瓶2-3mL),置于37℃培养箱中消化1-2分钟(难消化的细胞可以适当延长消化时间),然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加入3-4ml含10%FBS的培养基来终止消化。
3. 轻轻打匀后吸出,在1000RPM条件下离心3-5min,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀。将细胞悬液按1:2的比例分到新T25瓶中,添加6-8ml按照说明书要求配置的新的完全培养基以保持细胞的生长活力,后续传代根据实际情况按1:2~1:5的比例进行。
3)细胞冻存: 收到细胞后建议在培养前3代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。
公司正在出售的产品:
N-α-乙酰转移酶11抗体
NAA11
四连接源蛋白FJX1抗体
FJX1
肿瘤相关蛋白抗原L6抗体 Anti-TAAL6
酪氨酸磷酸酶α抗体 Anti-PTPRA
磷酸化核因子2相关因子2(Ser40)抗体 Anti-phospho-Nrf2 (Ser40)
前列腺跨膜上皮1抗原抗体 Anti-STEAP1
甲状腺素T4抗体
T4/L-Thyroxine
神经元Y连锁蛋白抗体(儿童自闭症相关蛋白)
NLGN4Y
转录因子SOX10抗体 Anti-SOX10
轴索过度生长抑制因子受体/Nogo受体抗体 Anti-Nogo R
原癌基因酪氨酸蛋白激酶受体RET/多发性腺瘤和甲状腺髓样癌蛋白抗体 Anti-Ret/HSCR1
膜型丝氨酸蛋白酶2抗体 Anti-TMPRSS4
大鼠大内皮素1elisa分析检测试剂盒
HCC1937人乳腺癌细胞Rat Big
endothelin-1 ELISA Kit
人结合珠蛋白/触珠蛋白(Hpt/HP)elisa分析检测试剂盒
HumanHpt/HPELISAKIT
caspase-3活性检测试剂盒分光光度法 20T
小鼠M型肌酸激酶(CKM)elisa检测试剂盒
大鼠血小板衍生生长因子BB(PDGF-BB)elisa检测试剂盒
MYC蛋白表达西方杂交分析试剂盒
钾离子通道多聚体结构域蛋白10抗体
KCTD10
转录调节因子C/EBPε抗体
CEBPE
即刻早期应答基因2蛋白抗体
IER2
α红细胞分化相关因子抗体
AHSP