操作步骤：
步骤1：配制程序冻存液，放在室温备用或放在4℃预冷
步骤2：离心收集对数生长期的细胞（贴壁细胞消化下来离心，悬浮细胞直接离心，转速1200rpm或250g，时间3min）
步骤3：用配制好的冻存液重悬细胞，按照1~1.5mL/管分装到冻存管中，拧紧管盖，做好标记
步骤4：冻存管放入冻存盒，冻存盒放入-80℃冰箱过夜（24h）
步骤5：冻存管从冻存盒取出，转移至液氮长期保存
方法二：使用无血清非程序冻存液
无血清非程序冻存液是一种商品化的冻存液，无需自己配制，无需降温盒，大大提升了便捷性。
但是，并非所有细胞都适用于这种冻存液，使用前必须做冻存测试，没问题后再批量应用。
细胞特性
|
英文名称
|
D283 Med:D283 Med
|
货号
|
XG-X3280
|
|
分类
|
人细胞系
|
种属
|
人
|
|
生长特性
|
半贴半悬
|
细胞形态
|
上皮细胞样
|
|
组织来源
|
脑组织
|
用途
|
仅供科研研究实验
|
生长特性 半贴半悬
细胞形态 上皮细胞样
生长培养基 MEM（含NEAA）＋10% FBS＋1% P/S
冻存条件
冻存液：55% 基础培养基+40%FBS+5%DMSO
温度：液氮
培养条件
气相：空气，95%；CO₂，5%
温度：37℃
推荐传代比例 1:2-1:4
推荐换液频率 2~3次/周
背景描述 D283 Med细胞是由Frien等人于1985年建系，源自一名6岁患有神经管细胞瘤有腹腔转移的白人男性小孩的腹水细胞。
年龄（性别） 男；6岁
组织来源 脑组织
细胞类型 肿瘤细胞
肿瘤类型 成髓瘤细胞
生物等级 1
倍增时间 ~52 hours
致瘤性 Yes, in nude mice(The cells
form serially transplantable intercranial and subcutaneous tumors.)Yes, in soft
agar
基因表达情况 The cells produce tumors in
nude mice and the resulting tumors are glutamine synthetase positive; neuron
specific enolase positive; glial fibrillary acidic proteins negative; S100
(S-100) protein negative; The cells express elevated levels of four biochemical
markers of SCLC (neuron specific enolase; the brain isoenzyme of creatine
kinase; L-DOPA decarboxylase; bombesin-like immunoreactivity)
保藏机构 ATCC; HTB-185IZSLER; BS TCL
203KCB; KCB 2010201YJ
运输和保存
干冰运输及复苏好存活细胞
（1）1mL冻存管包装干冰运输，收到后-80度冰箱保存过夜后转入液氮或直接复苏，若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们联系。
（2）T25瓶复苏的存活细胞常温发货，收到后按照细胞接收后的处理方法操作。
细胞接收后的处理
1）收到细胞后，75%酒精瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h，若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染，请拍照后及时联系我们。
2）请在4或5X显微镜下确认细胞状态，同时给刚收到的细胞拍照（10×，20×）各2-3张以及培养瓶外观照片一张留存，作为售后时收到时细胞状态的依据。
3）贴壁细胞：细胞在37℃培养箱中放置2-3h，显微镜下观察细胞的生长和贴壁情况，有些贴壁细胞在快递运送过程中会因振动脱落和脱落后成团的情况。若镜下观察细胞的生长密度若在60%以下，可去除培养瓶中灌液培养基（若有未贴壁的细胞需要离心回收，重悬打入到原培养瓶中）,加入新配制的完全培养基6-8mL，放到细胞培养箱中继续培养。若细胞生长密度达70%-80%以上，可以对细胞进行传代处理。传代过程中，若因运输振动脱落的细胞需要离心回收。
4）备注：运输用的培养基（灌液培养基）不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。 收到细胞后次传代建议T25培养瓶1：2传代 。
一．培养基及培养冻存条件准备
1） 准备1640（推荐iCell-0002）培养基；胎牛血清，10%；双抗，1%。
2） 培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。
3） 冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。
细胞处理
1） 冻存细胞的复苏
将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入到含4-6mL完全培养基的离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心3-5min，弃去上清液，完全培养基重悬细胞。然后将细胞悬液加入含6-8ml完全培养基的培养瓶（或皿）中37℃培养过夜。天显微镜下观察细胞生长情况和细胞密度。
2） 细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于贴壁细胞传代可以参考以下方法
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培养瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培养箱中消化1-2分钟（难消化的细胞可以适当延长消化时间），然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加入3-4ml含10%FBS的培养基来终止消化。
3. 轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心3-5min，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。将细胞悬液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照说明书要求配置的新的完全培养基以保持细胞的生长活力，后续传代根据实际情况按1:2~1:5的比例进行。
3）细胞冻存: 收到细胞后建议在培养前3代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。
公司正在出售的产品：
胞质动力蛋白轻链中间体1抗体 DNCLI1
补体因子H重组兔单克隆抗体 CFH
线粒体乙酰化酶3抗体 [KO验证抗体] SIRT3
心肌营养素1抗体 CT-1
磷酸化蛋白激酶C亚型G抗体 Phospho-PKC gamma (Thr514)
磷酸化紧密连接蛋白6抗体 phospho-Claudin 6 (Tyr219)
CD44v7抗体 CD44v7
CXXC型锌指蛋白4抗体 CXXC4
核仁蛋白9抗体 NOL9
核转录因子YB抗体 NFYB
轴突生长诱向因子G1/神经突起生长导向因子G1抗体 Netrin-G1
转录因子HES-1抗体 HES1
少突胶质细胞转录因子1抗体 OLIG1
神经细胞蜡样质脂褐质沉积病蛋白CLN3抗体 CLN3
MTO1蛋白抗体 MTO1
O-唾液酸糖蛋白内肽酶抗体 OSGEP
大鼠白介素2可溶性受体β链(sIL-2Rβ)elisa检测试剂盒
D283 Med人脑髓母细胞瘤细胞小鼠降钙素(CT)elisa分析检测试剂盒
苹果酸含量测试盒
酵母甘肽过氧化物酶（GSH PX）活性比色法定量检测试剂盒
脂肪酶（LPS)测试盒
大鼠糖原磷酸化酶工酶II(GP-II)elisa检测试剂盒
植物叶绿体总蛋白定量检测试剂盒
线粒体呼吸链复合物 Ⅴ 活性测试盒 20管/10样
生化法
人补体C1q（C1q）elisa检测试剂盒
血液磷酸二酯酶（PDE）总活性荧光定量检测试剂盒
小鼠糖皮质受体β(GR-β)elisa分析检测试剂盒
大鼠碱性磷酸酶(ALP)elisa检测试剂盒
LYRM2蛋白抗体
LYRM2
细胞角蛋白15重组兔单克隆抗体
Cytokeratin 15