产品特点: 本产品只适用于科研，不能用于临床诊断
灵敏度高：可检测个位拷贝数的基因
特异性高：有效避免非特异性扩增的出现
稳定性高：复孔间差异小，实验结果重复性强
扩增性能优：扩增效率高，荧光信号强
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产品名称
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柯萨奇病毒B4试剂盒荧光PCR法
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规格
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50T
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货号
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XG-R63376
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储存条件：
仅用于科研14℃或－20℃样品收集、处理及保存方法
1. 血清：使用不含热原和内**的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000 转离心10 分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2. 血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000 转离心30 分钟取上清。
3. 细胞上清液：3000 转离心10 分钟去除颗粒和聚合物。
4. 组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。3000 转离心10 分钟取上清。
5. 保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
PCR实验方法步骤：
方法
1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix （2mM）
4 μl 引物1（10pM）
2 μl 引物2（10pM）
2 μl Taq酶 （2U/μl）
1 μl DNA模板（50ng-1μg/μl）
1 μl 加ddH2O至 50 μl
实验过程：
一、试剂准备
1. DNA模板
2．对应目的基因的特异引物（在PCR反应中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制，而不能从无到有，凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根据你的模板链设计。因此，扩增不同的基因需要设计不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步骤
1．在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1（10pM）
2μl
引物2（10PM）
2μl
Taq酶（2U/μl）
1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl） 1 μl
加ddH2O至
50 μl
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2．调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，zui后在72℃ 保温7min。
3．结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4．PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μlLuFang进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。
三、注意事项
１．PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行。zui好设立一个专用的PCR实验室。
２．纯化模板所选用的方法对污染的风险有大影响。一般而言，只要能够得到可靠的结果，纯化的方法越简单越好。
３．所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。
４．PCR试剂配制应使用zui高质量的新鲜双蒸水，采用0.22μm滤膜过滤高压。
５．试剂都应该以大体积配制，试验一下是否满意，然后分装成仅够一次使用的量储存，从而确保实验与实验之间的连续性。
６．试剂或样品准备过程中都要使用一次性的塑料瓶和管子，玻璃器皿应洗涤干净并高压。
７．PCR的样品应在冰浴上化开，并且要充分混匀。
TNFa转染耐VP16绒癌细胞;JEG-3-VP16-TNFa21(R)-羟基孟鲁司特质量规格：美国进口21(R)-Hydroxy
Montelukast
MMP8 Others Human 人 MMP8 / CLG1 人细胞裂解液 (阳性对照) 21(S)-羟基孟鲁司特质量规格：美国进口21(S)-Hydroxy
Montelukast
中国仓鼠肺细胞;V79孟鲁司特二环己基胺盐质量规格：美国进口Montelukast
Dicyclohexylamine Salt
EPHA1 Others Mouse 小鼠 EphA1 / EPH receptor A1 人细胞裂解液 (阳性对照) 孟鲁司特1,2-二醇(非对映)质量规格：美国进口Montelukast
1,2-Diol(Mixture of Diastereomers)
A549 肺腺癌顺式-格列美脲质量规格：美国进口cis-Glimepiride
FGFR4 Others Rat 大鼠 FGFR4 / FGF
Receptor 4 人细胞裂解液 (阳性对照) BOC-L-丙氨酸Boc-L-alanine质量规格：>98%,BR
大鼠心肌细胞完全培养基 100mLC12E8 10%溶液C12E8质量规格：BR
UMR-106大鼠骨肉瘤细胞 Osteosarcoma cells in
UMR-106 rats DMEM培养基+10%FBS氟化钙(>98%,BR)Calcium floride质量规格：>98%,BR
干扰素硬脂酸钙Calcium stearate质量规格：BR
HFSF(人胚胎眼巩膜成纤维细胞) 5×106cells/瓶×2 普通变形杆菌香柏油Cedar wood oil质量规格：商品级
人毛细胞RNAHHDPC miRNA5 μgmetxYLCELLULOSE,4,000CENTIPOISES甲基纤维素**白色粉末RTsigma
ACLY Others Human 人 ACLY / acly / ATP ciate lyase 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照) 1,3-本二安;间本二安;1,3-二安基本 1,3-PhqnylqnqdicMinq;M-PhqnylqnqdicMinq;1,3-DicMinobqnzqnq;1,3-BqnzqnqdicMinq 108-42-
大耳山羊肾细胞;LDG-2言醋二双胍相关物质C MqtforMin Rqlctqd CoMpound
C;N,N-DiMqthyl-[1,3,5]triczinq-2,4,6-tricMinq 1982-46-
SK-N-MC细胞，神经上皮瘤细胞 鼠骨髓瘤细胞,P3/NS1/1-Ag4-1细胞 人胃腺癌细胞;SGC-7901
[SGC7901]异戊1酰嘌呤，英文名或英文缩写：2-IP，级别：BR，99%，规格：10克
小鼠Lewis肺癌瘤株;LLT597-12-6D(+)三糖D-(+)-MELEZITOSE
人上皮细胞;Ca Ski柳酸，英文名或英文缩写：Sallcylic acid，级别：CP，规格：100克
CPA1 Others Mouse 小鼠 CPA1 / CPA / Carboxypeptidase A1 人细胞裂解液 (阳性对照) 2-基本醇 98%
2-Mqthylbqnzyl clcohol 89-92-
tTA基因修饰的小鼠畸胎瘤细胞(B类);P19-CAG-tTA-3C3组蛋白A(小牛胸腺)，英文名或英文缩写：Histones,dried(Calf
thymus)，级别：重组体，规格：500克
CD70 Others Rat 大鼠 CD70 / CD27L / TNFSF7 人细胞裂解液 (阳性对照) 十四醇shēng huà shì jì容量：5克
人甲状腺滤泡上皮细胞完全培养基 100mLPoly-L-Lysine 25mg/100mg/1g原装 Sigma P1399
检测步骤：
一、 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振荡混匀后，10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照)，每个测试反应体系配制如下表：
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
总量 15 µL N×15µL
（1） 计算好各试剂的使用量，加入一适当体积洁净离心管中，充分混匀，10000rpm离心10s，向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液，向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qPCR反应条件
柯萨奇病毒B4试剂盒荧光PCR法将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
1循环 50℃ for 2 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团：设置为FAM。淬灭基团：NONE，请勿选择ROX参比荧光。