HPLC是目前检测细胞分裂素zui常用的方法之一,适用于植物组织、水培液等样品中的细胞分裂素分析。
检测步骤:
1、样品提取:
取新鲜植物组织(如根尖、茎尖等),迅速在液氮中冷冻并研磨成粉末。使用甲醇、氯仿和甲酸的混合溶液(如12:5:3)进行匀浆,离心后提取上清液。通过减压浓缩去除有机溶剂,得到细胞分裂素粗提取物。
2、样品纯化:
使用正丁醇在弱碱性条件下抽提细胞分裂素。通过离子交换柱层析(如磷酸纤维素柱)或分子筛柱(如LH Sephadex柱)进一步纯化。
3、HPLC分析:
色谱条件:通常使用C18反相色谱柱,流动相为乙腈-三乙胺缓冲液,梯度洗脱,柱温35℃,检测波长270nm。标准曲线:使用玉米素、玉米素核苷等标准品绘制标准曲线,计算样品中细胞分裂素的含量。
4、结果计算:
根据色谱峰面积和标准曲线,计算样品中细胞分裂素的浓度,并考虑回收率以校正数据。