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细胞稳转株构建病毒法过程

细胞稳转株构建病毒法过程:


1、确定目标细胞系的相关信息,细胞的培养条件,细胞的增值速度,支原体污染情况;


2、 预实验确定MOI值,可通过查阅文献确定慢病毒在目标细胞系中的MOI值也可参考查阅得到的数据,设计梯度实验,摸索合适MOI;


3、 预实验确定筛选药 物用量,常用的药 物筛选有:puro、G418、潮霉素等;


4、 细胞铺板,将需要的细胞量接种于合适的培养皿中;


5、 细胞感染,通过接种的细胞量及预实验得来的MOI来计算添加的病毒体积;


6、 撤病毒,第2天,一般不超过24h换液;


7、 转染48h后选择对应的抗性 药 物进行筛选;


8、 筛选结束后进行单克隆化,选择阳性克隆进行培养。

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