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细胞复苏具体操作

细胞复苏的原则-快速融化:必须将冻存在-196℃液氮中的细胞快速融化至37℃,使细胞外冻存时的冰晶迅速融化,避免冰晶缓慢融化时进入细胞形成再结晶,对细胞造成损害。

具体操作:

一. 实验前准备:

1.将水浴锅预热至37℃

2.用75%酒精擦拭紫外线照射30min的超净工作台台面。

3.在超净工作台中按次序摆放好消过毒的离心管、吸管、培养瓶等等。

二.取出冻存管:

1.根据细胞冻存记录按标签找到所需细胞的编号。

2.从液氮罐中取出细胞盒,取出所需的细胞,同时核对管外的编号。

三.迅速解冻:

1.迅速将冻存管投入到已经预热的水浴锅中迅速解冻,并要不断的摇动,使管中的液体迅速融化。

2.约1-2min后冻存管内液体完全溶解,取出用酒精棉球擦拭冻存管的外壁,再拿入超净台内。

四.平衡离心:

用架盘天平平衡后,放入离心机中3000r/min 离心3min

五.制备细胞悬液:

1.吸弃上清液。

2.向离心管内加入10ml培养液,吹打制成细胞悬液。

六.细胞计数:

细胞浓度以5×105/ml为宜。

七.培养细胞:

将复合细胞计数要求的细胞悬液分装入培养瓶内,将培养瓶放入37℃和5%CO2的培养箱内2-4小时(或者24-48小时)后换液继续培养培养,换液的时间由细胞情况而定。

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