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紫外光吸收法测定蛋白浓度试验程序
紫外光吸收法测定蛋白浓度:
1.用品和仪器:紫外分光光度剂,微量自动取液仪。
2.试剂:标准蛋白质溶液:准确称重的纯净蛋白质,配成1mg/ml储液置于4度中备用。
0.1mol/l磷酸缓冲液,PH7.4;0.1mol/l磷酸缓冲液,PH12.0。
3.试验程序:
1),在2个洁净干净的石英比色杯中(内径1cm)中加入蒸馏水或其他用于溶解标准蛋白质与待测样品的缓冲液,其中一个作为参比杯(在以后测量不变),另一个作为样品杯,放入分光光度剂的相应位置。
2),记录下空白杯在280260nm处的光吸收值,或对之进行250-350nm波长范围的基线扫描。
3),移去样品比色杯中的蒸馏水或是缓冲液,干燥比色杯(用滤纸吸取残液)。
4),在样品比色杯中加入待测样品液,在实验中提取样品30ul加入2970ul双证水,混匀,样品液事先通过离心或用0.2um孔径的滤膜过滤。
5),重复2步骤
6),蛋白含量计算:蛋白浓度(mg/ml)=1。55A280—0.76A260
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