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​蛋白质印迹(WB)灌胶与上样

WB,蛋白质印迹(Western blotting)又称免 疫印迹(immunoblotting),是根据抗原抗体的特异性结合检测复杂样品中的某种蛋白的方法。
灌胶与上样:
1. 玻璃板对齐后放入夹中卡紧。然后垂直卡在架子上准备灌胶。
2. 配 10% 分离胶,加入TEMED后立即摇匀即可灌胶。灌胶时,可用10ml枪吸取5ml 胶沿玻璃放出,待胶面升到绿带中间线高度时即可。然后胶上加一层水,液封后的胶凝的更快。
3. 当水和胶之间有一条折射线时,说明胶已凝了。再等3min使胶充分凝固就可倒去胶上层水并用吸水纸将水吸干。
4. 配 4% 的浓缩胶, 加入 TEMED 后立即摇匀即可灌胶。将剩余空间灌满浓缩胶然后将梳子插入浓缩胶中。待到浓缩胶凝固后,两手分别捏住梳子的两边竖直向上轻轻将其拔出。
5. 用水冲洗一下浓缩胶,将其放入电泳槽中。
6. 在电泳槽的上、下槽中加入1×Tris-甘氨酸或SDS电泳缓冲液,上样。
7. 连接电泳槽到电泳仪。上槽接负极,下槽接正极,通电起始电压70~ 80V,10min后100V,电泳2h或当溴酚蓝迁移至离底部1cm时,停止电泳。


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