细胞传代操作步骤

细胞传代操作步骤：

细胞密度达到80-90%时即可传代。

1、弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次；

2、加入2ml0.25%（T25瓶），使覆盖整个瓶或皿，盖好放入培养箱消化；

3、1-2min后，显微镜下观察细胞，若大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入完全培养基终止消化；若细胞还是贴壁，放回培养箱继续消化至可以轻轻吹打下为止；

4、将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清；

5、用新鲜培养基重悬后加入培养瓶或皿中，T25培养瓶加6-8ml培养基；

6、悬浮细胞直接离心收集，细胞沉淀重悬后分到新培养瓶中。